Ko celice, v katerih gojimo

tovarna celicso onesnaženi, z večino jih je težko rokovati.Če so kontaminirane celice dragocene in jih je težko ponovno pridobiti, se lahko za njihovo odstranitev uporabijo naslednje metode.

1. Uporabljajte antibiotike

Antibiotiki so učinkovitejši pri ubijanju bakterij vtovarne celic.Kombinirano zdravljenje je učinkovitejše od samostojnega zdravljenja.Preventivna zdravila so učinkovitejša od zdravil po kontaminaciji.Preventivna zdravila običajno uporabljajo dvojni antibiotik (penicilin 100 e/mL plus streptomicin 100 µg/mL).Po kontaminaciji mora biti način čiščenja 5- do 10-krat večji od običajne količine.Zdravilo je treba uporabljati 24 do 48 ur po dodatku, nato pa ga nadomestiti z običajno rutino.Kulturna tekočina.Ta metoda je lahko učinkovita v zgodnjih fazah kontaminacije.Poleg penicilina in streptomicina lahko uporabljeni antibiotiki vključujejo tudi gentamicin, kanamicin, polimiksin, tetraciklin, nistatin itd. Običajno se uporabljajo 400 do 800 μg/mL kanamicina ali 200 μg/mL tetraciklina.Gojišče menjamo vsake 2 do 3 dni in ga prenašamo na 1 do 2 generaciji za zdravljenje.V zadnjih letih so poročali, da so 4-fluoro, 2-hidroksikinolin (ciprofloksacin, Cip), derivat plevromutilina (derivat plevromutilina, BM-Cyclin2: BM-1 in tetraciklinski derivat (BM-2)) antibiotiki. učinkovit pri ubijanju mikoplazme, kadar se uporablja sam ali v kombinaciji.Vsi ti trije antibiotiki so pripravljeni v 250X koncentriranih raztopinah v PBS in shranjeni pri -20 °C za kasnejšo uporabo.Uporabna koncentracija Cip je 10 μg/mL, BM-1 je 10 μg/mL in BM-2 je 5 μg/mL.Pri uporabi najprej aspirirajte kontaminirano gojišče kulture, dodajte gojišče kulture RPMI1640, ki vsebuje BM-1, nato aspirirajte gojišče kulture po 3 dneh, dodajte medij kulture RPMI1640, ki vsebuje BM-2, in gojite 4 dni in tako naprej 3 dni zapored. .krogih, dokler se s 33258 mikroskopijo s fluorescentnim barvanjem ne dokaže, da je bila mikoplazma izločena, nato se doda normalno gojišče za kulturo in pasažo 3-4 krat.

2. Toplotna obdelava

Inkubacija kontaminirane tkivne kulture pri 41 °C za 18 ur lahko uniči mikoplazmo, vendar ima škodljive učinke na celice.Zato je treba pred zdravljenjem opraviti predhodni test, da se razišče čas segrevanja, ki lahko v največji meri uniči mikoplazmo in ima najmanjši vpliv na celice.Ta metoda je včasih nezanesljiva.Če ga najprej obdelamo z zdravili in nato segrejemo na 41°C, bo učinek boljši.

3. Uporabite serum, specifičen za mikoplazmo

Kontaminacijo z mikoplazmo lahko odstranimo s 5 % imunskim serumom kunčje mikoplazme (hemaglutinacijski titer 1:320 ali več).Ker lahko specifično protitelo zavira rast mikoplazme, postane negativno 11 dni po zdravljenju z antiserumom in ostane negativno 5 mesecev kasneje.je negativen.Vendar je ta metoda bolj težavna in ni tako priročna in ekonomična kot uporaba antibiotikov.

4. Druge metode

Poleg zgoraj navedenih metod odstranjevanja kontaminacije obstajajo še metode inokulacije in sterilizacije živali, metode fagocitoze makrofagov, metode dodajanja bromouracila kontaminiranim.steklenice kulturein nato obsevanje s svetlobo ter metode filtracije itd., vendar so vse bolj težavne in neučinkovite.Zato se, ko enkrat pride do kontaminacije z mikoplazmo, razen če je zelo pomembna, običajno zavrže in ponovno goji.

kontaktirajte Whatsapp & Wechat: +86 180 8048 1709